透射电镜生物样品制备步骤

2021-09-28 1979

整个过程,样品不能暴露在空气中!

1.取材:

组织块小于1立方毫米

2.固定:

2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定4小时或更长时间, 4度冰箱保存(您只要做到这一步)。

用0.1M磷酸漂洗液漂洗      15分 三次

1%锇酸固定液固定       1-1.5小时

用0.1M磷酸漂洗液漂洗      15分 三次

3.脱水

50%乙醇                 15-20分

70%乙醇                 15-20分

90%乙醇                 15-20分

100%乙醇              20分钟

100%丙酮          15-20分三次

4.包埋:

纯丙酮+包埋液(3:1)干燥箱室温2小时

纯丙酮+包埋液(1:1)干燥箱室温 过夜

纯包埋液            37度2-3小时

5.固化:

37度烘箱内              过夜

45度烘箱内              12小时

60度烘箱内              48小时

6.超薄切片机切片70到120nm

7.2%醋酸铀-柠檬酸铅双染色

8.透射电镜H-7800观察。拍片。