透射电镜生物样品制备步骤
整个过程,样品不能暴露在空气中!
1.取材:
组织块小于1立方毫米
2.固定:
2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定4小时或更长时间, 4度冰箱保存(您只要做到这一步)。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次
1%锇酸固定液固定 1-1.5小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次
3.脱水
50%乙醇 15-20分
70%乙醇 15-20分
90%乙醇 15-20分
100%乙醇 20分钟
100%丙酮 15-20分三次
4.包埋:
纯丙酮+包埋液(3:1)干燥箱室温2小时
纯丙酮+包埋液(1:1)干燥箱室温 过夜
纯包埋液 37度2-3小时
5.固化:
37度烘箱内 过夜
45度烘箱内 12小时
60度烘箱内 48小时
6.超薄切片机切片70到120nm
7.2%醋酸铀-柠檬酸铅双染色
8.透射电镜H-7800观察。拍片。